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如何挑取单克隆,你做对了吗?

小编经常会?#25317;?#31185;研工作者关于Addgene质粒如何培养的电话咨询。尤其,很多人是第一次收到?#29992;?#22269;漂洋过海后,终于等来的质粒。关于Addgene推荐什么方法来复苏收到的穿刺菌的问题,快来看看Addgene的权威说明。

 

常见问题&FAQ

  • 如何复苏穿刺菌?
  • 为什么一定要挑取单克隆菌落?
  • 如?#20301;?#32447;培养?

下面这个视频中就这些问题做了详细的说明。赶快点击视频学习吧!别忘记了把好东西分享哦!

https://v.qq.com/x/page/f05261hn3a3.html?

 

为什么一定要挑取单克隆?

当从?#35270;?#20445;存的细菌或者穿刺菌中复苏细菌时,从琼脂板上挑取单菌落再液体培养显得尤为重要。

为什么呢?由于?#35270;?#33740;或穿刺菌中的大多数细菌细胞在遗传上应该是相同的,但是偶然情况下,会存在个别隐藏的突变细菌。如果你只是简单的从混合菌落中挑选了一团细菌,然后在液体培养基中培养,那么突变的细菌就有可能会接管整个培养物,从而影响您的实验。我们可以通过划线挑选单个菌落的方式来解决问题。在这种情况下,每个单独的菌落就是单克隆,即它们在遗传学上是相同的。使用这些单克隆菌落形成的液体培养物,将会获得预期的质粒产?#20160;?#22312;后期试验中获得更一致的结果。

 

划线前需要准备的材料

  • 在正式开始培养前,我们需要收集一些必要的材料。
  • 首先是含有你?#34892;?#36259;质粒的?#35270;?#33740;或穿刺菌;
  • 其次是含有合?#22763;?#29983;素的LB琼脂平板;
  • 无菌的牙签或者无菌的接?#21482;罰?/li>
  • 酒精灯或其他火焰;
  • 30或37摄氏度的干燥培养箱;
  • 最后是良好的无菌操作技术。

 

划线培养方法

首先,我们取出含有适当抗生素的LB琼脂平板,确保平板上没有污染并且干燥。如果平板上有水珠,你可以把它打开然后放在火焰下约10分钟来风干。接下来,我们要看一下我们的穿刺菌,确保其中有可见的细菌生长。然后取一个无菌的牙签,把它插入并接触到有细菌生长的穿刺区域,这个过程?#37096;?#20197;是将无菌的牙签浸入到半融化的?#35270;?#33740;当中。请注意的是,在牙签上你不需要看到肉眼可见的一团细菌,看起来很干净的牙签表面可能已经被细菌充分覆盖了。

用牙签轻轻地从平板的边缘附近开始划线,牙签与平板接触角度大概在45度左右。请注意一定要轻轻的划线,不要用牙签刺破平板,否则你就会在划线过程中将琼脂翘起?#30784;?#22312;划线时要遵循一定的路径,并且需在每个新路径开?#38469;?#29992;一根新的无菌牙签。用第一根牙签划线时,我们需要轻轻地连续划线大约至1/3平板大小,并注意避免碰到平板的边缘。?#25317;?#31532;一根牙签,并转动平板,然后使用一根新无菌牙签?#30001;?#19968;次结束的地方开?#21058;?#32493;划线约 1/3区域,并在靠近边缘的地方结束。最后,我们用第三根牙签再重复一次这一过程。尽管,这个过程会很快,我们仍需要很细心。

需要确保在培养之前平板是完全干燥的。这是由于,如果细菌在平板上是一层液体的话,它们有可能会在平板上扩散并形成一层菌群而不是单个的菌落。需要注意的是,要将平板倒置放入培养箱中,?#21592;?#20813;冷凝的液体会滴到菌落上而干扰它们的生长。现在我们已经完成了划线,我们将平板倒置放入培养箱中过夜或者至少培养12小时。你可以看到我们精心划线后会有单个菌落出现,之后就可以挑取单个菌落?#21592;?#29992;于下游各种各样的实验。

 

中原生物是Addgene公司授权的中国独家代理

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